直接在尾静脉注射fitc-右旋糖酐标记血管、注射罗丹明b标记细胞外间隙就行了。



没什么技术含量，研究生都能轻松驾驭。



“接下来，需要监测四项指标。”许秋说道。



其一，血脑屏障完整性。



这个很简单，直接用双光子实时成像血管渗漏就行。



第二，紧密连接蛋白cud-5。



cud-5是神经功能的守门人，从某种方面来说，血脑屏障的完整性与它有着密不可分的关系。



可以说，这个实验的重要指标，基本上都是靠cud-5验证的。



而检测cud-5本身，则是主要是靠免疫组化+westernblot（脑微血管）。



随后，是小胶质细胞活化，在皮层进行iba-1免疫荧光。



最后则是血清血脑屏障修复机制，利用气相色谱-质谱来判断，其涉及到了丁酸、乙酸的浓度，以及至关重要的cud-5基因敲除！



“这个方案……也做出了很多优化啊。”莫雷蒂有些愕然。



赖光圳等人也不禁点头，目中有着钦佩之色。



许秋的方法，和常规法子比起来，优势大上不少。



比如检验血脑屏障的完整性这一点。



常规手法，是监测分辨菌群的丰度。



而许秋则改换成了双光子实时成像血管渗漏，优点显而易见，便是可以动态观测血脑屏障修复过程。



其次，短链脂肪酸修复血脑屏障这一点，许秋对cud-5基因的敲除，堪称妙笔。



没有了cud-5基因，小鼠的血脑屏障应当会濒临崩溃。



此时补充短链脂肪酸，若是能够见到血脑屏障渗漏有所改善，则能证明，短链脂肪酸能够修复血脑屏障！



另外，监测小胶质细胞活化也有着巨大优势。



常规方法，只会在实验前、实验后查一次神经炎症。



但，活体小胶质细胞成像却可以实时追踪神经炎症消退。



这能清晰地反应阿克曼菌、短链脂肪酸等等在抗炎方面发挥的作用！



很快，各组实验小鼠都依然准备完毕。



第一件要做的事情，就是确定阿克曼菌已经定值成功，且血清丁酸上升。



经过检测，实验组的阿克曼菌，翻了将近七百倍。



而对照组用的是生理盐水，并无明显变化。



血清丁酸方面，实验组小鼠达到了85个单位，说明血清中丁酸含量已经达到可用的标准。



随后，是检测血脑修复的证据！



双光子成像显示，实验组渗漏面积比、与对照比相较而言，减少了百分之七十！



cud-5表达，westernblot灰度值上升百分之一百五十！



足足一点五倍。



这意味着，实验组的血脑屏障非常完整！



而evans蓝渗出，也仅仅只有31μg/g左右，差不多只有对照组的一半不到。



evans蓝渗出是能直接反映血脑屏障完整性的指标，这无疑进一步确定了短链脂肪酸对血脑屏障的修复作用！



而最后的神经炎症抑制……



经检测，iba-1免疫荧光实验组细胞数大约每视场只有28个，而对照则则有足足95个，下降了约百分之七十！



此外，脑脊液il-6，实验组也远远低于对照组。



这两个指标，都意味着进行了阿克曼菌定植的实验组，在血脑屏障修复、神经炎症控制方面，都有着碾压一般的优势！



最终，就是给基因敲除小鼠做实验了。



按理说，敲除了cud-5基因后，小鼠的血脑